· poliacrilamidaEl gel debe estar compuesto por monómero de acrilamida, material de inicio de polimerización, catalizador y la mezcla adecuada de sal y tampón.
· acrilamiday BIS (N, N '- metileno doble acrilamida) es la matriz de gel en forma de monómero.
El persulfato de amonio inicia el proceso de polimerización del adhesivo. La formulación del pegamento requiere una solución de persulfato de amonio al 10 % preparada en agua. La mayoría de la información indicaba la necesidad de un uso activo. Sin embargo, la solución al 10 % puede mantenerse a 4 °C durante varias semanas sin una pérdida significativa de actividad. Complete hasta 10 ml y deséchelo cuando el pegamento no se adhiera.
Consejo: El porcentaje deacrilamidaEn la secuenciación, el pegamento y el pegamento proteico no son lo mismo. Si usa una solución de acrilamida: BIS prefabricada, asegúrese de obtener la botella correcta.
TEMED (N,N,N',N'-tetrametiletilendiamina) es un catalizador que se presenta en una botella marrón y se guarda en el refrigerador. Se añade justo antes de verter el pegamento.
El vidrio utilizado en la electroforesis de poliacrilamida debe lavarse antes y después de cada electroforesis. Después de la electroforesis, lávelo con un cepillo suave y un paño en agua caliente jabonosa, enjuague con agua destilada y deje secar.
La humedad y el polvo pueden causar el uso de polímeros huecos. Antes de la electroforesis, limpie la placa de vidrio con limpiacristales y límpiela con un cepillo suave. Lávela con agua destilada y séquela bien con una toallita de papel. Enjuagar con etanol al 70 % antes de limpiarla con papel ayuda a limpiar y a acelerar el secado. Añada muestras de acrilamida sucesivamente: BIS, agua, solución tampón, persulfato de amonio, TEMED. Agite bien y vierta inmediatamente.
No es necesario desgasificar la poliacrilamida antes de la polimerización. (Antes, la acrilamida se colocaba al vacío para eliminar las burbujas, ya que el oxígeno inhibe la polimerización).
Puntas de muestra de puntos de pegamento horizontales.
· Coloque un trozo de papel negro en la caja inferior, fondo negro para hacer algunos agujeros de muestra para ver más claramente.
· Tanque de pegamento lleno de buffer, justo por encima del coloide.
Si el borde tiene luz, enciéndala y deje que la luz ilumine el coloide. Extraiga la muestra con la pipeta.
· utilizando dispositivo de pipeteo automático.
En muestras de 10 a 200 μl, el punto de movimiento de líquido se puede utilizar en la mayoría de los puntos. Para muestras con orificios muy pequeños (menos de 10 μl), resulta más conveniente el cabezal de pipeta largo para secuenciar el pegamento.
Pipetear justo sumergido en la muestra, inhalando el fluido en movimiento lento. La muestra puede quedar pegajosa con glicerina, y el bombeo rápido puede generar burbujas de aire en el cabezal de la pipeta.
Después de inhalar las muestras, mueva el cabezal de pipeteo suavemente sobre el borde del tubo o use papel absorbente para aspirar el líquido fuera de las gotas. Tenga cuidado de no aspirar la muestra.
Coloque la muestra en el orificio de muestra.
· Dispositivo de pipeteo para mantener un poco de presión, hacer que las muestras se muevan ligeramente y desborden el cabezal del líquido.
El cabezal de pipeteo se inserta en el tampón, ligeramente por encima de los orificios de punción, para mantener la presión positiva. La punta de la pipeta se puede insertar en un pequeño orificio.
Expulse las muestras lenta y constantemente. Coloque la punta de la pipeta sobre el orificio de la muestra y la muestra se hundirá en él. Deje que la muestra se hunda para llenar el orificio en lugar de empujarla.
· Una vez que la última gota de muestra con líquido en la cabeza, el líquido se moverá a la segunda pierna, elevará lentamente el movimiento del líquido, saldr del tampón
¿Cómo hacer un muestreo de pegamento vertical?
Se forman orificios verticales de muestra con pegamento entre dos piezas de vidrio. Con pegamento muy diluido, la punta de la pipeta ni siquiera puede insertarse entre dos placas de vidrio. ¡Cuidado con la glicerina! Coloque la punta de la pipeta sobre el orificio de muestra y la muestra se hundirá en él.
Antes de tomar la muestra, asegúrese de enjuagar bien la punta vertical del gel de acilo de polipropileno. Elimine la acrilamida no polimerizada y el agua que pueda acumularse en el fondo del orificio. El agua puede reducir considerablemente el tamaño del orificio. Utilice una jeringa de 25 ml o 50 ml y una aguja de calibre 18. Vierta el tampón de electroforesis y enjuague cuidadosamente el orificio.
Puede ser difícil ver el orificio de la muestra, pero el resto es sencillo. Si hay orificios excesivos, se puede analizar el tampón de muestra con azul de bromofenol.
Hora de publicación: 31 de marzo de 2023