· poliacrilamidaEl gel debe por monómero de acrilamida, material de partida de polimerización, catalizador y el derecho de la mezcla de sal y tampón.
· acrilamiday BIS (N, N '- Doble acrilamida de metileno) es la matriz de gel de forma monómero.
· Proceso de polimerización adhesiva de inicio de persulfato de amonio. La formulación del pegamento requiere una solución de persulfato de amonio al 10% preparada en agua. La mayor parte de la información indicaba la necesidad de uso activo. Sin embargo, la solución al 10% se puede colocar a 4 ℃ durante varias semanas sin una pérdida significativa de actividad. Realice hasta 10 ml y deseche cuando el pegamento no se agrega.
Consejo: el porcentaje deacrilamidaEn la secuenciación, el pegamento y el pegamento proteico no es el mismo. Si usa la solución de acrilamida prefabricada: BIS, asegúrese de obtener la botella correcta.
· Temed (N, N, N ', N'- Tetrametil etilendiamina) es un catalizador, en una botella marrón, colocada en el refrigerador. Agregue justo antes de verter pegamento.
· La electroforesis de poliacrilamida usada vidrio en electroforesis debe lavarse antes y después de cada vez. Después de la electroforesis, lave con un cepillo y un paño suaves en agua jabonosa caliente, enjuague con agua destilada y seque para secar.
· La humedad y el polvo pueden causar con polímero hueco. Antes de la electroforesis, limpie la placa de vidrio con limpiador de vidrio y límpielo con un cepillo suave. Lave con agua destilada y seque bien con una limpieza de papel. El enjuague con etanol al 70% antes de limpiar con papel ayuda a limpiar y acelerar el secado. Agregue las muestras de acrilamida sucesivamente: bis, agua, solución de tampón, persulfato de amonio, temido. Agite bien y vierta inmediatamente.
No es necesario desgasificar la poliacrilamida antes de la polimerización. (La acrilamida solía colocarse en el vacío para eliminar las burbujas porque el oxígeno inhibe la polimerización).
Consejos de muestra de punto de pegamento horizontal.
· Coloque un trozo de papel negro en la caja inferior, fondo negro para hacer un orificio de muestra para ver más claramente.
· Buffer lleno de tanque de pegamento, justo sobre el coloide.
· Si el borde tiene una luz, enciende las luces, deja que la luz brille coloide. Dibuja la muestra en la pipeta.
· Uso del dispositivo automático de pipeteo.
· En 10-200 mu 1 punto de movimiento líquido se puede usar en la mayoría de los puntos de la muestra. Para agujeros de muestra muy pequeños (menos de 10 μ1), la cabeza de pipeta larga utilizada para la secuenciación del pegamento es más conveniente.
· La pipeteo se sumerge en la muestra, inhalando el líquido en movimiento lento. La muestra puede parecer pegajosa con glicerina, y el bombeo rápido puede atraer burbujas de aire en la cabeza de la pipeta.
· Las muestras después de inhalar cabezal de pipeteo moverán suavemente la cabeza del fluido en el borde de la tubería o el papel de limpieza chupa la cabeza líquida fuera de las gotas. Tenga cuidado de no chupar la muestra.
Coloque la muestra en el orificio de muestra
· Dispositivo de pipeteo Para mantener un poco de presión, haga que las muestras muevan ligeramente la cabeza líquida de desbordamiento.
· El cabezal de pipeteo insertado en el búfer, ligeramente más alto que los agujeros del punto, mantiene la presión positiva. La punta de la pipeta se puede insertar en un pequeño orificio.
· Lenta y constantemente las muestras. La punta de la pipeta se coloca sobre el orificio de muestra de punto, y la muestra se hundirá en el orificio. Deje que la muestra se hunda para llenar el orificio de muestra en lugar de empujar.
· Una vez que la última gota de muestra con cabeza líquida, el líquido se moverá hacia la segunda pierna, elevará lentamente el movimiento de líquido, se mueve fuera del tampón
¿Cómo hacer un muestreo de pegamento vertical?
· Los agujeros de muestra de punto de pegamento vertical se formaron entre dos piezas de vidrio. En pegamento muy delgado, la cabeza de la pipeta ni siquiera se puede insertar entre dos placas de vidrio. ¡Mira la glicerina! Coloque la cabeza de la pipeta sobre el orificio de muestra y la muestra se hundirá en el orificio.
· La muestra de punto antes, asegúrese de colocar el punto vertical del orificio de muestra de gel de acilo de polipropileno enjuagado. Lave la acrilamida no polimerizada y el agua que puede aparecer en el fondo del orificio de muestra. El agua puede hacer que el orificio de muestra sea significativamente más pequeño. Use una jeringa de 25 ml o 50 ml y una aguja de calibre 18. Vierta el tampón de electroforesis y enjuague cuidadosamente el orificio de muestra.
· Puede ser difícil ver el orificio de muestra, pero al mismo tiempo, el resto es fácil. Si hay agujeros en exceso, el búfer de muestra se puede probar con azul de bromofenol.
Tiempo de publicación: mar-31-2023