· poliacrilamidaEl gel debe estar formado por monómero de acrilamida, material de partida de polimerización, catalizador y el derecho de sal y mezcla tampón.
· acrilamiday BIS (N,N'-metileno doble acrilamida) es la matriz de gel en forma de monómero.
· Persulfato de amonio inicia proceso de polimerización del adhesivo.La formulación del pegamento requiere una solución de persulfato de amonio al 10% preparada en agua.La mayor parte de la información indicó la necesidad de un uso activo.Sin embargo, la solución al 10% se puede colocar a 4 ℃ durante varias semanas sin una pérdida significativa de actividad.Completar hasta 10 ml y desechar cuando el pegamento no se agregue.
Consejo: El porcentaje deacrilamidaen la secuenciación el pegamento y el pegamento proteico no son lo mismo.Si usa acrilamida prefabricada: solución BIS, asegúrese de obtener el frasco correcto.
· TEMED (N,N,N',N'-tetrametiletilendiamina) es un catalizador, en una botella marrón, colocado en el frigorífico.Agregue justo antes de verter el pegamento.
· Electroforesis de poliacrilamida El vidrio utilizado en electroforesis debe lavarse antes y después de cada vez.Después de la electroforesis, lave con un cepillo suave y un paño en agua caliente y jabón, enjuague con agua destilada y deje secar.
· la humedad y el polvo pueden causar con polímero hueco.Antes de la electroforesis, limpie la placa de vidrio con limpiacristales y frótela con un cepillo suave.Lavar con agua destilada y secar bien con un paño de papel.Enjuagar con etanol al 70% antes de limpiar con papel ayuda a limpiar y acelerar el secado.Añadir sucesivamente muestras de acrilamida: BIS, agua, solución tampón, persulfato de amonio, TEMED.Agite bien y vierta inmediatamente.
No es necesario desgasificar la poliacrilamida antes de la polimerización.(La acrilamida solía colocarse al vacío para eliminar las burbujas porque el oxígeno inhibe la polimerización).
Puntas de muestra de puntos de pegamento horizontales.
· coloque un trozo de papel negro en el cuadro inferior, con fondo negro para hacer un agujero de muestra para ver más claramente.
· depósito de cola lleno de buffer, justo encima del coloide.
· si el borde tiene luz, encender las luces, dejar que la luz brille coloide.Introduzca la muestra en la pipeta.
· mediante dispositivo de pipeteo automático.
· en 10-200 mu 1 punto de movimiento líquido se puede utilizar en la mayoría de los puntos de la muestra.Para orificios de muestra muy pequeños (menos de 10 μ1), es más conveniente el cabezal de pipeta largo utilizado para el pegamento de secuenciación.
· pipetear recién sumergido en la muestra, inhalando el fluido que se mueve lentamente.La muestra puede parecer pegajosa con la glicerina y el bombeo rápido puede atraer burbujas de aire hacia el cabezal de la pipeta.
· las muestras después de inhalar el cabezal de pipeteo, moverán el cabezal del líquido suavemente sobre el borde del tubo o limpiarán con papel el cabezal del líquido para aspirarlo fuera de las gotas.Tenga cuidado de no chupar la muestra.
Coloque la muestra en el orificio de muestra.
· Dispositivo de pipeteo para mantener un poco de presión, hacer que las muestras se muevan ligeramente y rebalsen la cabeza del líquido.
· el cabezal de pipeteo insertado en el tampón, ligeramente más alto que los orificios, mantiene una presión positiva.La punta de la pipeta se puede insertar en un pequeño orificio.
· lentamente y de manera constante las muestras.La punta de la pipeta se coloca encima del orificio de la muestra puntual y la muestra se hundirá en el orificio.Deje que la muestra se hunda para llenar el orificio de la muestra en lugar de empujarla hacia adentro.
· una vez que la última gota de muestra con la cabeza líquida, el líquido se moverá a la segunda etapa, el líquido se elevará lentamente y saldrá del tampón.
¿Cómo hacer un muestreo de pegamento vertical?
· Orificios de muestra de puntos de pegamento verticales formados entre dos piezas de vidrio.En el caso de colas muy finas, la cabeza de la pipeta ni siquiera se puede introducir entre dos placas de vidrio.¡Cuidado con la glicerina!Coloque el cabezal de la pipeta sobre el orificio de la muestra y la muestra se hundirá en el orificio.
· Antes de limpiar el punto de muestra, asegúrese de enjuagar y enjuagar el punto vertical del orificio de muestra de gel de acilo de polipropileno.Lavar la acrilamida no polimerizada y el agua que pueda aparecer en el fondo del orificio de muestra.El agua puede hacer que el orificio de muestra sea mucho más pequeño.Utilice una jeringa de 25 ml o 50 ml y una aguja de calibre 18.Vierta el tampón de electroforesis y enjuague con cuidado el orificio de la muestra.
· Puede resultar difícil ver el orificio de muestra, pero al mismo tiempo el resto es fácil.Si hay exceso de agujeros, el tampón de muestra se puede analizar con azul de bromofenol.
Hora de publicación: 31-mar-2023